EPC（鲤鱼上皮细胞）

EPC（鲤鱼上皮细胞）

一、生长特性：Adherent贴壁细胞

二、培养温度：25°C (20-30°C)

三、敏感病毒：

Infectious pancreatic necrosis virus传染性胰腺坏死病毒

Infectious hematopoietic necrosis virus传染性造血坏死病毒

Spring Viremia of Carp Virus鲤春病毒血症病毒

Viral hemorrhagic septicemia virus病毒性出血性败血症病毒

Epizootic hematopoietic necrosis virus流行性造血坏死病毒

Largemouth bass virus大口黑鲈病毒

四、培养条件

该细胞系的基本培养基为ATCC制定的Eagle's Minimal Essential Medium培养基，目录号30-2003。为制作完整的生长培养基，向基础培养基中添加以下成分：胎牛血清，最终浓度为10%。

Eagle最低基础培养基（Eagle's Minimal Essential Medium）简称MEME培养基，是一种细胞培养基，由Harry Eagle 研发，用于组织培养物中细胞的护理。本培养基配方中含有Earle's salts和非必需氨基酸、L-谷氨酰胺、丙酸钠和碳酸氢钠。本培养基中碳酸氢钠含量减少(NaHCO3, 1.5 g/L)，适用于5% CO2条件下培养。如果培养条件中CO2浓度高于5%，则需要增加碳酸氢钠含量。

三、复苏

1、在20-30°C水浴中轻轻搅拌，解冻小瓶。为减少污染的可能性，请将O形圈和盖远离水。解冻应迅速（约2分钟）。

2、一旦内容物解冻，立即将小瓶从水浴中取出，并通过浸泡或喷洒70%乙醇进行去污。从这一点开始的所有操作都应在严格的无菌条件下进行。

3、将小瓶内容物转移到含有9.0 mL完整培养基的离心管中，并以约125 x g的速度旋转5至10分钟。

4、用推荐的完整培养基重新悬浮细胞颗粒（有关培养物推荐稀释比，请参阅特定批次信息），并分配到25 cm2或75 cm2培养瓶中。在细胞恢复过程中，避免培养基碱度过高很重要。建议在添加小瓶内容物之前，将含有完整生长培养基的培养容器置于培养箱中至少15分钟，以使培养基达到其正常pH值（7.0至7.6）。pH值（7.0至7.6）。

五、传代

本协议中使用的体积适用于75 cm2的烧瓶；按比例减少或增加其他尺寸培养容器的分离培养基量。

1、取出弃掉培养液

2、用不含Ca++/Mg++的Dulbecco磷酸盐缓冲盐水（D-PBS）或0.25%（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA溶液短暂冲洗细胞层，以去除所有含有胰蛋白酶抑制剂的微量血清。

3、向烧瓶中添加1.0至2.0 mL胰蛋白酶EDTA溶液，并在倒置显微镜下观察细胞，直到细胞层分散（通常在5分钟内）。

4、添加6.0至8.0 mL完整生长培养基，轻轻移液吸取细胞。

5、向新的培养容器中加入适当的细胞悬浮液。建议接种量为5 x 103至7 x 103活细胞/cm2。

6、在25°C下培养。我们建议将培养物的细胞浓度保持在1 x 105和2 x 105个细胞/cm2之间。

传代率：1：4-1：6

六、冻存

添加5%（v/v）二甲基亚砜（ATCC 4-X）的完整生长培养基

培养时间：36h